生化定標基礎知識

分類：公司新聞
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發布時間：2023-08-15
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【概要描述】生化定標基礎知識-洛陽恒恩生物科技有限公司-1、什么是定標(生化儀測定原理)朗伯-比爾定律是生化儀的理論基礎，樣本+試劑進行反應，測得的是吸光度(A)，需要轉化成濃度(或者活力單位)才有臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和吸光度之間的關系。定標，即測定已知濃度(或活力單位)的校準品，根據生化儀測得的吸光度，進行擬合，得到濃度和吸光度之間的關系曲線---校準曲線，將樣本+試劑反應的吸光度帶入校準曲線，就可以得到濃度。(如下圖所示)

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　　1、什么是定標(生化儀測定原理)朗伯-比爾定律是生化儀的理論基礎，樣本+試劑進行反應，測得的是吸光度(A)，需要轉化成濃度(或者活力單位)才有臨床意義。因此需要建立濃度(或活力單位)和吸光度之間的關系。定標，即測定已知濃度(或活力單位)的校準品，根據生化儀測得的吸光度，進行擬合，得到濃度和吸光度之間的關系曲線---校準曲線，將樣本+試劑反應的吸光度帶入校準曲線，就可以得到濃度。(如下圖所示)

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　　2、生化試劑的相關基礎(上機要點)參數設置內容：波長(主副波長)，反應時間、樣品量、試劑量、讀點時間、反應方向、分析方法、校準方法、校準濃度等。3、生化反應的監測根據反應類型的不同，曲線被分為反應曲線、校準曲線等。(下圖是反應曲線示例)

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　　反應曲線的縱坐標為吸光度值，橫坐標為反應時間。反應時間即測光點，當一個反應杯通過一次光度計光路時，就會被測定一次吸光度，兩次通過光路的間隔就是一次讀點時間，也可以說反應盤旋轉一圈所用的時間。反應曲線是反應監測的主要信息內容。在反應曲線上能看到樣品、試劑加入時的時間、對應吸光度。除反應曲線監測外，平時還有試劑空白監測，查看試劑空白吸光度。校準曲線是反映校準的過程，并為計算結果提供依據。校準曲線根據校準方法分為線性曲線和非線性曲線兩種;根據校準點的多少分為單點線性曲線和多點線性非線性曲線。(下圖是校準曲線)

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　　校準曲線的縱坐標是吸光度軸，橫坐標是濃度軸。線性曲線有一點或多點，過零點和不過零點多種。非線性曲線一般都是多點，有樣條曲線(Spline)、對數曲線(Logit-Log3P、Logit-Log4P、Logit-Log5P)、函數曲線、折線曲線等。在參數正確的情況下，校準曲線的每個點是校準品和相應試劑反應后的結果。校準曲線結果與校準方法的選擇，會直接影響結果的準確和穩定。4、定標影響因素①重復性不好校準品沒有混勻或者試劑穩定性較差，可通過精密度實驗排查原因。②校準類型根據校準品濃度和吸光度之間呈現的關系，選擇合適的校準類型。如果校準品濃度和吸光度呈線性關系，則不建議使用樣條函數擬合;Logit雙對數函數3P、4P、5P，雖然都是“收斂型”函數，但是收斂程度不一樣，根據收斂程度確定合適的雙對數函數校準類型。③校準品濃度校準品濃度如果設置不合理，有可能擬合結果較差，導致點不在校準曲線上，定標回測較差。

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